12月15日，卫生部临床检验中心发布全国外周血胎儿染色体非整倍体（T21、T18和T13）高通量测序检测室间质量评价通知，表示将于度正式开展全国外周血胎儿染色体非整倍体（T21、T18和T13）高通量测序检测室间质量评价。
室间质量评价也称为能力验证实验（以下简称PT），是指多家实验室分析同一标本并由外部独立机构收集、反馈实验室上报结果并评价实验室操作的活动，通过实验室间的比对判定实验室的校准、检测能力以及监控其持续能力。长期以来，PT一直是临床实验室和公共卫生实验室质量保证的一个重要组成部分。
室间质评目的：提高实验室外周血胎儿染色体非整倍体（T21、T18和T13）高通量测序检测的质量
卫生部对全国外周血胎儿染色体非整倍体（T21、T18和T13）高通量测序检测展开室间质量评价，主要目的是提高实验室外周血胎儿染色体非整倍体（T21、T18和T13）高通量测序检测的质量。通知原文如下：
“新一代高通量测序技术发展迅速，并已由实验室研究进入到临床检测应用，如外周血胎儿染色体非整倍体（T21、T18和T13）检测、胚胎植入前遗传学诊断（PGD和胚胎植入前遗传学筛查（PGS）等，其中外周血胎儿染色体非整倍体（T21、T18和T13）检测目前已有国家食品药品监督管理总局（CFDA）批准的仪器和试剂。为提高实验室外周血胎儿染色体非整倍体（T21、T18和T13）高通量测序检测的质量，卫生部临床检验中心于度正式开展全国外周血胎儿染色体非整倍体（T21、T18和T13）高通量测序检测室间质量评价。”
室间质评结果：绝大多数结果符合预期
这并不是卫生部第一次发布全国外周血胎儿染色体非整倍体（T21、T18和T13）高通量测序检测室间质量评价通知，11月，为配合卫计委新一代高通量测序技术应用试点工作，卫生部临床检验中心开展了该项目的全国室间质量评价活动，并要求各临床实验室使用日常所用试剂和程序进行检测。以下是室间质评主要结果，数据来源于《全国外周血胎儿染色体非整倍体（T21、T18和T13）高通量测序检测室间质量评价调查活动结果报告》。
1、样本情况
本次共发放20个质评样本，编号分别为1401、1402、1403、1404、1405、1406、1407、1408、1409、1410、1411、1412、1413、1414、1415、1416、1417、1418、1419、1420。样本为人血浆，样本量为700μl。其中15份样本用于本次PT成绩评价，5份样本用于正式质评发放样本类型的参考，不纳入本次PT成绩评价。具体信息见下表。
2、各检测平台使用的实验室数及相关参数
本次质评涉及多个检测平台（由于CFDA为检测仪器和配套试剂共同审批，因此本小结中所提及的检测平台，除LDT外，均同时代表该平台及相应的配套试剂）。其中有医疗器械注册证的检测平台：BGISEQ-100（武汉华大基因生物医学工程有限公司），BGISEQ-1000（武汉华大基因生物医学工程有限公司），DA8600（中山大学达安基因股份有限公司）等。其他检测平台有：NextSeqCN500，BioelectronSeq4000，NextSeq500，IonProton，Hiseq2000，Hiseq2500，IontorrentPGM。需要说明的是，没有医疗器械注册证的试剂和仪器，均属实验室自用方法（laboratorydevelopedtest，LDT），具体不同平台的参数见下表。
3、实验室回报结果情况
共计有81家实验室回报质评结果，4家实验室报告了两个平台的检测结果，共计收到结果85份，其中有效结果84份（即回报结果完整、在截止日期内回报的结果）。医院临床实验室共计回报73份结果，独立实验室回报12份结果。总体来说，本次质评绝大多数实验室的检测结果均符合预期结果。在15份PT评价样本中，98.8%(83/84)的实验室与预期结果完全相符，只有1家实验室两份阳性样本报告了“临界/灰区”的结果，其余结果也均与预期结果相符，具体的总体结果回报情况见下表。
4、各检测平台不同样本的符合率情况
一家使用Hiseq2500的实验室报告了1405和1413号样本（预期结果为T13阳性）“临界/灰区”的结果。其他平台所有实验室检测结果均与预期结果相符，无假阴性和假阳性结果。
5、各检测平台对所有样本检测的测序原始数据量和唯一比对reads数情况
6、PT成绩情况
PT成绩≥80（即80和100分）的实验室发放质评合格证书；PT成绩 80分的实验室和未回报完整定性结果的实验室发放质评参加证书。本次质评中，PT成绩为100分的实验室83家，PT成绩在80~100分（含80分）的实验室1家。1家实验室获得质评参加证书。
对开展高通量测序NIPT临床检测实验室的启示
在室间质评的报告最后，卫计委指出：虽然各临床实验室的检测结果良好，但基于本检测项目在大多数实验室均尚未对临床开展，因此，在将来正式开展高通量测序NIPT临床检测中，仍需谨慎对待。
尽管目前商业化的平台（包括CFDA批准或正在进行注册的平台）在生物信息学分析和结果判读方面，进行了简化，但是与以往临床实验室开展的核酸检测项目相比，基于高通量测序的NIPT仍然是一个相对复杂的检测过程。通常，NIPT的检测流程包括：DNA提取，文库构建，文库纯化，文库定量，文库混合、测序以及结果分析的过程，完成一个批次的检测至少需要3~4天，此外，在文库构建和文库定量中，会涉及到PCR扩增过程。
因此，如实验室开展高通量测序NIPT的日常检测，需为临床基因扩增实验室，具有一定的核酸检测的基础，选择合适的检测平台，并进行性能验证，具备经过严格培训的高素质实验人员，建立实验室检测的标准操作程序，在每批次的检测中需使用阴性质控和弱阳性质控，参加室间质量评价。
具体来说，在本次质评中，部分实验室仅有两个不同的区域，不符合临床基因扩增实验室的设置要求；在选择检测平台时，医院临床实验室不建议采用实验室自用方法(LDT)，因为LDT首先需要建立自配试剂的标准操作程序，然后还需对检测系统（包括检测仪器、试剂以及生物信息学算法）进行性能评价，给出重复性、分析敏感性、分析特异性、临床敏感性、临床特异性、阳性预测值以及阴性预测值等等性能指标，而目前来说，对于单个临床实验室，要完成NIPT的性能评价是非常困难的；实验室需建立标准操作程序，并需考虑到开展大量样本检测后，出现文库构建失败、检测过程操作错误、QC未通过以及“灰区”样本需复检等情况，以及针对此情况，评价可能对检测流程和报告时间产生的影响；在当前的实验室环境条件下，仪器设备经过一定时间的运行后，是否仍能够保持良好的性能，能否保持原有的QC未通过率以及检测失败率；此外，也不排除技术快速的发展，新的检测平台的出现，或者在原有检测平台上的进一步更新，导致现有的检测平台可能面临更新或淘汰。
临床实验室需明确，基于高通量测序的NIPT，只是一种筛查试验，而不是诊断试验，遗传咨询和进一步的检测非常重要。并且由于检测原理是基于外周血游离DNA，因此具有一定的检测局限性，例如母体嵌合、胎盘嵌合、双胎、外周血胎儿游离DNA比例低等均会对结果产生影响。
总结：无创产前检测离规范使用又近了一步
不管怎样，卫计委发布室间质评，就已预示着这项技术成熟、临床应用急需的检测离规范使用又近了一步，而率先通过室间质评的技术平台，例如上文提到的华大基因、达安基因、贝瑞和康、博奥生物等公司，无疑将在后续竞争中获得合作终端和客户更多的信任。
（原文标题：卫生部：全国胎儿无创产前检测实验室室间质评申请开始）
