唐氏综合征产前筛查系统(贝喜)
【生产厂家】上海复旦张江生物医药股份有限公司
【批准文号】国药准字S0017
【剂 型】试剂盒
【规 格】96人份
【医保类型】
【国家基本药物】否
【英文名】Downs Syndrome Screening System
【汉语拼音】Tang Shi Zong He Zheng Chan Qian Shai Cha Xi Tong
【正文】
【用途】
用于孕中期（孕14～20周）唐氏综合征或其他染色体异常的产前筛查。
【试验原理】
唐氏综合征又称先天愚型，是发病率较高的染色体异常病，发病率约为1/750。本品采用二项血清筛查指标:甲胎蛋白（AFP）和绒毛膜促性腺激素（β-hCG），即通过AFP、β-hCG的定量测定和数据分析软件计算唐氏综合征产前筛查危险系数，用于唐氏综合征或胎儿其他染色体异常的产前筛查。
AFP和β-hCG的定量测定均采用双抗体夹心法:分别用AFP和β-hCG单克隆抗体包被微孔板，分别采用另一株AFP和β-hCG单克隆抗体标记辣根过氧化物酶，采用TMB显色系统，通过标准曲线，得到血清标本中AFP和β-hCG的浓度。
数据分析软件对危险系数的计算主要是参考Reynold（1990）提出的唐氏综合征危险系数计算公式，根据本品中国正常人群妊娠中期（孕14～20周）妇女血清样本中AFP、β-hCG含量数据库，计算AFP和β-hCG的正常人群中位数，用“相应指标的体重校正值/相应孕周正常孕妇血清AFP和β-hCG的中位数”得到正常妊娠孕妇外周血AFP和β-hCG的临界值，再利用以上指标计算似然比（Gaussian高度比），根据危险系数的定义（危险系数=1/似然比f(x)），分别求出AFP和β-hCG两项指标的危险系数，综合年龄因素得到完整的“唐氏综合征产前筛查危险系数”。
【主要组成成分】
【适用仪器】
1.200μl及1000μl单通道可调移液器，配套一次性吸管尖头；
2.200μl 8通道可调移液器，配套一次性吸管尖头；
3.蒸馏水；
4.玻璃管和试剂瓶（用于混合显色液A和显色液B及配制清洗液）；
5.吸水纸或纸巾；
6.酶标仪（含450nm滤光片）；
7.电脑（CPU主频要求高于500，内存高于128M）。
【样本要求】
抽取孕中期（14~20周）孕妇外周血2ml（孕周以B超或末次月经法计算），置一次性采血管内，室温静置1～2小时后2000转/分离心15分钟，吸取血清。若不能及时检测，血清标本应低温冻存，检测时应将标本融化后混合均匀，并避免反复冻融。血清标本在4℃冰箱只能存放一个星期。已稀释的血清不宜存放。所有标本均看作有潜在感染性的物品，操作和保存时按国家标准执行。
【试验方法】
一、试剂准备
1.测前，所有试剂置于冰箱（2～8℃）内，临用前2～5分钟取出使用。
2.浓缩清洗液用纯水或蒸馏水稀释30倍，即30ml浓缩清洗液＋870ml纯水或蒸馏水，摇匀备用，作为清洗液。
二、样本AFP浓度的测定
1.AFP标准品的稀释
(1)向AFP标准品F瓶中加入1.2ml稀释液，混匀，浓度为40IU/ml；
(2)向AFP标准品B、C、D、E管中分别加入300μ1稀释液；
(3)从AFP标准品F瓶中取300μ1混匀的液体加到AFP标准品E管中，混匀；
(4)从AFP标准品E瓶中取300μ1混匀的液体加到AFP标准品D管中，混匀；
(5)依此类推，AFP标准品C、B的制备同上，AFP标准品A即为稀释液；标准品稀释后需在短期内用完。
2.质控品的稀释
AFP质控品1和2:分别加入1.2ml稀释液，混匀。
3.加样
(1)选择AFP抗体包被板；
(2)在待测标本的孔中先分别加入80ul稀释液；
(3)分别取6个标准品（A～F）及2个质控品100ul直接加入相应抗体包被板孔内；
(4)直接取20ul待测标本加到已加入80ul稀释液的抗体包被板中；
(5)将加好样的酶标板水平轻轻晃动以混匀样本，置密封袋内，37℃水浴孵育1小时。
4.洗板
甩去孔内液体，用稀释好的清洗液加满各孔，略静置一下，甩去板内液体，再加入清洗液，重复操作共5次，拍干。
5.酶标抗体反应
(1)将置于冰箱内的AFP酶标抗体取出；
(2)将AFP酶标抗体100μ1/孔加入相应的孔中，加毕，即刻计时；
(3)将酶标板置于密封袋中，37℃水浴孵育15分钟；
(4)重复洗板操作。
6.显色
(1)将置于冰箱内的显色液A、显色液B取出；
(2)将显色液A、显色液B按1:1比例等体积混匀；
(3)每孔加入100ml的混匀显色液，加毕，即刻计时，避光、37℃水浴孵育12分钟；
(4)每孔加入200μ1终止液，终止反应。
7.比色
用酶标仪于450nm波长（双波长酶标仪可以630nm波长为参考波长），读取光密度值（OD值）。
三、样本β-hCG浓度的测定
1.β-hCG标准品的稀释
(1)向β-hCG标准品F瓶中加入1.2ml稀释液，混匀，浓度为30mIU/ml；
(2)向β-hCG标准品B、C、D、E管中分别加入300μ1稀释液；
(3)从β-hCG标准品F瓶中取300μ1混匀的液体加到β-hCG标准品E管中，混匀；
(4)从β-hCG标准品E瓶中取300μ1混匀的液体加到β-hCG标准品D管中，混匀；
(5)依此类推，β-hCG标准品C、B的制备同上，β-hCG标准品A即为稀释液；标准品稀释后需在短期内用完。
2.质控品的稀释
β-hCG质控品1和2:分别加入1.2ml稀释液，混匀。
3.加样
(1)选择β-hCG抗体包被板；
(2)在待测标本的孔中先分别加入80μ1稀释液；
(3)β-hCG的6个标准品（A～F）及2个质控品均直接取100μ1加入相应孔内；
(4)直接取20ul待测标本加到已加入80ul稀释液的抗体包被板中；
(5)将加好样的酶标板水平轻轻晃动以混匀样本，置密封袋内，37℃水浴孵育1小时。
4.洗板:
甩去孔中液体，用稀释好的清洗液加满各孔，略静置一下，甩去板中液体，再加入清洗液，重复操作共5次，拍干。
5.酶标抗体反应:
(1)将置于冰箱内的β-hCG酶标抗体取出；
(2)将β-hCG酶标抗体100ml/孔加入相应孔中，加毕，即刻计时；
(3)将酶标板置于密封袋中，37℃水浴孵育15分钟；
(4)重复洗板操作。
6.显色
(1)将置于冰箱内的显色液A、显色液B取出；
(2)将显色液A、显色液B按1:1比例等体积混匀；
(3)每孔加入100ml的混匀显色液，加毕，即刻计时，避光、37℃水浴孵育12分钟；
(4)每孔加入200μ1终止液，终止反应。
7.比色:
用酶标仪于450nm波长（双波长酶标仪可以630nm波长为参考波长），读取光密度值（OD值）。
四、质量控制
1.若样本浓度超过标准曲线范围，可将标本进一步稀释后再做检测；
2.若样本的OD值低于标准品A的OD值，可相应减少稀释的倍数再做检测；
3.AFP质控品1应为2.5～7.5IU/ml，AFP质控品2应为30～38IU/ml，标准曲线相关系数（r）应≥0.95，否则实验失败，应重做。
4.β-hCG质控品1应为3.0～7.0mIU/ml，β-hCG质控品2应为16～24mIU/ml，标准曲线相关系数（r）应≥0.95，否则实验失败，应重做。
五、结果分析
1.将AFP浓度测定的标准品、质控品及标本的OD值输入配套的数据分析软件；
2.将β-hCG浓度测定的标准品、质控品及标本的OD值输入配套的数据分析软件；
3.将标本对应的孕妇的年龄（单位:岁）和孕周（单位:周）输入配套的数据分析软件；
4.通过数据分析软件，计算唐氏综合征或胎儿其他染色体异常的危险系数；
5.危险系数的临界值为1/275；
6.对产前筛查结果的解释:
1）本品的使用目的为产前筛查。本品以临床筛查的假阳性率5%确定了危险系数的临界值。目前的临床研究资料显示，该试验能检出65%左右的唐氏综合征妊娠，至今世界上还没有一种达到100％正确的筛查方法。
2）根据孕妇年龄和血清样本中AFP/β-hCG测定值得到的综合危险系数，是提示唐氏综合征的发生概率也即可能性，概率越高，可能性越大。危险系数小于临界值，并不能完全排除患有唐氏综合征及染色体异常的可能性，该结果只是表明与其他胎儿相比，患有唐氏综合征胎儿的机会相对较低。危险系数大于临界值的孕妇，只是表明胎儿患有唐氏综合征的机会较其他胎儿稍高，危险系数大于临界值的孕妇，建议按《产前诊断技术管理规范》做进一步的产前筛查和产前诊断。
3）即使是高危孕妇也未必一定是唐氏综合征妊娠，而低危孕妇也未必一定不是唐氏综合征妊娠，因此，再次强调本项目提供给孕妇的医学信息仅是妊娠的风险概率，而非胎儿疾病的诊断。
【产品性能指标】
1.最低检出量
AFP:2.0IU/ml
β-hCG:2.0mIU/ml
2.测定范围
AFP:0～40IU/ml
β-hCG:0～30mIU/ml
3.测定精密度
AFP:≤12%
β-hCG:≤12%
4.本系统危险系数临界值为1/275，筛查假阳性率为5%。
【注意事项】
1.请详细阅读本品说明书；
2.每次检测必须同时做AFP和β-hCG的标准曲线及质控品，不能使用以前做过的标准曲线；
3.如果一个试剂盒一次使用不完，且几次检测时间间隔较长，建议将剩余的标准品及质控品置于低温(0℃以下)冰箱冷冻保存，下一次使用前取出，融化后混匀再使用(酶标抗体不宜低温冷冻)；
4.建议一个试剂盒(48人份)最好一次使用完，若条件不允许也不要分两次以上使用，这样不但标准品及质控品不够用，而且会造成浪费(每次都要有8孔来作标准品及质控品)，同时标准品及质控品的反复多次冻融会对检测结果造成影响；
5.如果条件允许，建议将标准品和质控品做双孔，结果以两孔的平均值计算；
6.建议待测标本的稀释在酶标板外进行（100ul待测标本＋400ul稀释液），混匀后分别取100ul加入相应板条，可避免漏加或错加待测标本；
7.一次未用完之包被板条应密封保存，贮藏及应用时不要将试剂暴露于强热、光下；
8.本试剂盒仅供体外诊断用，一个盒应作为整体应用，不要将不同批号的试剂混合用，并请在有效期内使用；
9.含大量脂质、严重黄疸及溶血或加热灭活之标本均可能影响检测结果；
10.建议按《产前诊断技术管理办法》的有关规定，使用本品。
【包装、规格】
本品有两个规格:
1）48人份/盒；
2）96人份/盒。
【贮存】
2~8℃，避光保存。
【有效期】
12个月
【批准文号】
国药准字S0017
